Microscopía, histología y patología comparada

Responsable

Ignacio Ruz Caracuel

Personal

Silvia Sacristán (Histología)

Begoña Cuevas (Microscopía)

Contacto

  • Equipamiento
    • Criostato CryoStar NX50 para muestras de tejido congeladas.
    • Microtomo Microm modelo HM325 para muestras de tejido en parafina.
    • Horno de hibridación ACD HybEZ II.
    • Tissue microarrayers.
    • Campana extractora
    • Microscopio confocal Nikon ECLIPSE Ti con sistema de adquisición de imágenes.
    • Microscopio invertido de fluorescencia Zeiss Axio Observer 7
    • Microscopio de fluorescencia ECLIPSE Ci equipado con cámara Nikon DS-Ri1.
    • Microscopio óptico Motic BA310 equipado con cámara MOTICAMS3.
    • Estación de trabajo para el análisis de imagen. Software NIS ELEMENTS.
  • Destacables
    • Cartera de servicios con técnicas histológicas básicas (en tejidos parafinas y congelados), inmunohistoquímica, inmunofluorescencia, aptahistoquímica, TUNEL y sistemas de detección morfológicos de ARNm.
    • Equipo de microscopios ópticos y de fluorescencia, con sistemas de microscopía confocal y de estudio de muestras in vivo mediante fluorescencia.
    • Asesoramiento en la interpretación de secciones histológicas humanas y de modelos animales por patólogos.
    • Adquisición de imágenes histológicas y asesoramiento para la cuantificación mediante softwares de uso libre (Fiji, QuPath).
  • Cartera de servicios y tarifas

    Microscopía

    **Consultar tarifas con la unidad

    Microscopía confocal

    Obtención de imágenes de microscopía confocal procedentes de muestras fijadas (Imágenes de múltiple marcaje, experimentos de colocalización multipunto (X,Y,Z), FRAP)


    Microscopía confocal in vivo

    Estudio de muestras in vivo (cultivos celulares con marcadores fluorescentes) a lo largo de una secuencia temporal mediante un sistema de incubación celular de cabina con control de la temperatura, humedad, y de gases y con sistema de perfusión.


    Microscopía convencional y de epifluorescencia

    Adquisición de imágenes con luz transmitida (tinciones clásicas, inmunohistoquímicas) y procedentes de inmunofluorescencias mediante el set de imagen digital con cámara para fotografía. Obtención de imágenes de gran tamaño formadas por varios campos individuales para el estudio de zonas de interés ("Stitching").


    Tratamiento y análisis de imagen

    Asesoramiento técnico a la hora de procesar, cuantificar y analizar la información procedente de las imágenes obtenidas. Se dispone de una estación de trabajo "off-line" con software específico dedicada exclusivamente al análisis de imagen

    Histología

    Preparar un bloque de parafina

    Incluye la deshidratación de las muestras en sucesivos alcoholes de concentración creciente, aclarado en xilol e inclusión en parafina.

    Tanda de 1 a 10 muestras


    Cortar un bloque de parafina*

    Corte de secciones de la muestra incluida en parafina, de espesor entre 5 y 20 micras, flotación de las secciones en un baño caliente y montaje de las secciones sobre portaobjetos. En el caso de que las secciones se vayan a teñir con colorantes utilizamos la albúmina como adhesivo de las secciones sobre los portaobjetos,  pero si se van a utilizar para inmunohistoquímica se utilizarán portas especiales con carga positiva, lo que encarece el coste. 


    Tinción de Hematoxilina y Eosina

    Para la tinción de las secciones se utilizará hematoxilina de Harris (solución de Papanicolaou) y una solución de eosina alcohólica; las secciones se deshidratarán y se cubrirán, utilizando Entellan como medio de montaje. 


    Preparar un bloque congelado

    Impregnación de las muestras histológicas en sacarosa al 30% en tampón fosfato-salino, y su posterior recubrimiento con OCT para su congelación en hielo seco en polvo, y almacenamiento a -70ºC.


    Cortar un bloque  congelado*

    Corte de la muestra congelada en un criostato a una temperatura de -20ºC  (puede variar según la dureza del tejido), obteniendo  secciones de espesor de 10 micras o mayor, flotación de las secciones en tampón fosfato-salino frío y montaje de las secciones sobre portaobjetos. En caso de que las secciones se vayan a teñir con colorantes, se utilizará albúmina como adhesivo de las secciones sobre los portaobjetos; en caso de que se destinen a inmunohistoquímica se utilizarán portas especiales con carga positiva, lo que encarece el coste. 


    Inmunofluorescencia*

    Incluye los siguientes tratamientos sucesivos de las secciones: el desenmascaramiento del antígeno en un tampón específico a alta temperatura, el bloqueo con suero no inmune y tritón X-100, la incubación en el anticuerpo primario y posteriormente la detección del anticuerpo con un anticuerpo secundario conjugado a fluorocromo. En el medio de montaje utilizado para cubrir las secciones, se incluye Hoechst para poder visualizar los núcleos de las células presentes en las secciones.


    Inmunoperoxidasa con amplificación de señal*

    Incluye los siguientes tratamientos sucesivos de las secciones: inhibición de la peroxidasa endógena con agua oxigenada, desenmascaramiento del antígeno en un tampón específico a alta temperatura, bloqueo con suero no inmune y tritón X-100 e incubación en el anticuerpo primario. Para la detección del anticuerpo se utilizará una técnica de amplificación de señal que consiste en incubaciones sucesivas en un anticuerpo secundario conjugado a biotina, y en una solución de estreptoavidina conjugada a peroxidasa, y, por último, el tratamiento con agua oxigenada y diaminobencidina con los que reacciona la peroxidasa para dar un producto color marrón. Los núcleos de las células se teñirán suavemente con hematoxilina de Harris. 


    * Si los cortes dieran problemas por la consistencia del tejido o por algún problema en la preparación del bloque, el coste se encarecería en función del tiempo de trabajo adicional que se realizara

    * El anticuerpo primario lo debe suministrar el propio cliente.